生命科学与技术系 生化技术综合实验报告 设计（论文）题目鸡蛋中卵磷脂的提取与鉴定 姓 名 学 号 所属系 专业年级 电子邮箱 指导教师 电子邮箱 年 月 卵磷脂是 甘油、胆碱、磷酸、饱和及不饱和脂肪酸组成的一种磷脂类物质， 它是构成细胞膜、核膜、质体膜等生物膜的本成份、研究之后发现卵磷脂具延缓衰 老、促进神经传导、提高大脑活动、增强记忆力，促进脂肪代谢、防止出现脂肪 肝、降低血清胆固醇等方面的作用。被英国科学家喻为“健脑的黄金、养心的极 品”在西方国家卵磷脂被誉为与蛋白质、维生素并列的“第三营养素”。卵磷脂 在动植物体内分布广泛?其中以蛋黄中含量最为丰富。 卵磷脂按照其纯度的高低，大体上分为 PC50、PC60、PC70、PC80 PC90、 PC95等产品形式。最咼可以提纯到 98%因为其纯度越咼，氧化性能越强， 故提纯到98%勺卵磷脂需要做氢化处理。然后保存。未经过氢化处理的卵磷 脂，一般要求在充氮的密封容器中。 纯净的卵磷脂常温下为一种无色无味的白色固体，由于制取或精制方 法、储存条件不同而呈现淡黄色至棕色。 利用95%乙醇在蛋黄溶液里进行浸提取，再加入过滤，加入一定量的丙 酮在旋转干燥仪器中把乙醇蒸发出来， 取溶胶性的物质，加入丙酮冲洗除杂，冲 洗多次取得粗品，让后再加入无水乙醇溶解，加入金属沉淀剂进行精提取，取出 少量精品，在碱性条件下溶解，分别用钼酸铵，斐林试剂，滤纸，氢氧化钠，对 卵磷脂进行定性检测 卵磷脂的提取与鉴定 卵磷脂（lecithin） 是一种含磷的类脂类生理活性物质,同时又是一种天然 表面活性剂[1?2],化学名称为磷脂酰胆碱，它是构成细胞膜、核膜、质体膜 等生物膜的基本成份，空间结构的卵磷脂分子是由一个极性的“头部” （甘油和 TOC \o 1-5 \h \z 胆碱磷酸脂部分）和两条非极性的“尾巴”（两个依附于甘油主框架上的脂肪酸） 组成，它是典型的两性电解质[3]大多分布在在大脑、神经系统、免疫系统及心、 肝、肾、生殖腺等重要器官内），是人体必需的胆碱和必需脂肪酸的重要来源 [4] 纯净的卵磷脂常温下为一种无色无味的白色固体，由于制取或精制方 法、储存条件不同而呈现淡黄色至棕色。 目前，我国已经有10余家公司制作大豆卵磷脂 ，而且均是小规模的生 产装置，还未形成工业化生产规模，技术水平也落后于世界领先水平 [5], 生产蛋黄卵磷脂的厂家则更少。国内的卵磷脂产量远远不能够满足市场需要 ， 因此大部分卵磷脂特别是高纯度卵磷脂仍然依靠进口。动物性原料中蛋黄 含卵磷脂最多,达干物质总重的8%?10% 实验目的意义： 1.1掌握卵磷脂的提取方法及其鉴别判定的方法， 对卵磷脂进行定性 检测，了解卵磷脂的性质， 1.2掌握离心干燥技术，熟练应用提纯技术 1.3掌握抽滤等的基本操作 二.实验原理 1.1卵磷脂在脑、神经组织、肝、肾上腺和红细胞中含量较多。 卵磷脂易溶于乙醇、等脂溶剂，可利用此溶剂提取。由于卵磷脂 不溶于丙酮，可以用丙酮多次冲洗除去一部分杂质， 金属离子复合沉淀 法进行精提纯，新提取的卵磷脂为白色蜡状物，新提取的卵磷脂为 白 色，当与空气接触后，其所含不饱和脂肪酸会被氧化而使卵磷脂呈黄 褐色。卵磷脂被碱水解后可分解为脂肪酸盐、甘油、胆碱和磷酸盐。 甘油与硫酸氢钾共热，可 生成具有特殊臭味的丙烯醛；磷酸盐在酸 性条件下与钼酸铵作用， 生成黄色的磷钼酸沉淀； 胆碱在碱的进一步 作用下生成无色且具有氨和鱼腥气味的三甲胺。这样通 过对分解产 物的检验可以对卵磷脂进行检验确定。 实验材料和方法 试验材料与试剂 新鲜鸡蛋、无水乙醇、95％乙醇、、丙酮、甲醇.会属沉淀剂 （ZnCI2） 、丙酮、 蒸馏水、溴的四氯化碳、氢氧化钠、红色石蕊试纸、钼酸铵、硫酸氢钾 试验仪器 三角瓶、烧杯、试管、真空冷冻干燥箱、磁力搅拌器、玻璃棒、 电子天平、冷冻干燥器、 冰箱、离心机、 水浴锅 试管夹、量筒、滤布、漏 斗。 试验方法 （1） 蛋黄卯磷脂的粗提、 首先将鸡蛋打破， 称量鸡蛋 300 克 除去蛋白，，将蛋黄放人洁净的带塞的三角 瓶中．在称量蛋黄 加入95%乙醇（用量12m], g）浸取，于磁力搅拌器搅拌60min后，静置15min .然 后加 人（用量为乙醇用量的1/3），搅拌15min后静置15min,过滤三次，将 滤液收集放旋转蒸发器中低温、减压浓缩 加入一定量的丙酮除杂．卵磷脂即沉淀出来．过滤，用丙酮冲洗几次，至冲 洗液无色．即得蛋黄卯磷脂粗晶存放于冰箱里保存。 [6] 图一，过滤除杂 图二，卵磷脂的粗提取 蛋黄卵磷脂的纯化 金属离子复合沉淀法 把卵磷脂粗品溶于无水乙醇中?加入金属沉淀剂 40%的zncl2水 溶液?待生成沉淀后，分离出沉淀物?而后加入丙酮洗涤，然后放于真空中冷冻 干燥仪中干燥?最终得到精制的卵磷脂.[7] 更改试剂，由于实验室里没有 zncl2，所以用znso4代替，由于丙酮不能除去 znso4,所以在过滤后采用氯仿把卵磷脂溶解沉淀的方法，离心除去 zn so 4,然 后在真空冷冻干燥仪中干燥得到纯品。 图三，离心提纯分离 、卵磷脂的鉴定 (3.1 )三甲胺的检验： 取干燥试管一支，加入少量提取的卵磷脂以及 2?5mL 10%氢氧化钠溶液， 放沸水浴试管中加热10mi n,在管口放一片红色石蕊试纸，观察颜色有没有变化， 并嗅其气味。将加热过的溶液过滤，滤液供下面检验。 (3.2 )、脂肪酸的检测： 取棉花上固体少许，滴加20%NaO一滴，另加5mL蒸馏水，观察结果。 (3.3 )、磷酸的检验： 取干净试管一支，加入10滴上述滤液和5?10滴95%L醇溶液，然后再加入 5~10滴钼酸铵试剂，观察现象；最后将试管放入热水浴中加热 5?10mi n，观察 有何变化。 (3.4 )、甘油的检验： 取干净试管一支，取1% CuSO4两滴20% NaOH无沉淀，即加1mL水解液，振摇。 四.实验结果(现象) 1.4.1卵磷脂粗提结果： 500mL烧杯重166.96g,三百克鸡蛋去壳后于烧杯中重 244.12g,鸡 蛋黄重量77.16g。 实验结束后以小烧杯盛装，小烧杯重 23.94g，加粗品卵磷脂后重 29.11g，得粗品卵磷脂共5.17g。占总中量的6.7 %。 1.4.2 卵磷脂精提结果： 烧杯总重 71.25g ，取出卵磷脂后，净重 69.15g ，净取得卵磷脂 2.1g 。占 粗提取比例 40.62 ％，占鸡蛋黄总重比例 2.72 ％。 1.4.3 检测结果： a、 三甲胺的检验结果：管口红色石蕊试纸变蓝，于管口围其气味有浓重 的鱼腥味 b、 脂肪酸的检测结果：脂肪酸碱性水解，成细小颗粒。 c 、磷酸的检验结果：加钼氨酸后溶液后显黄色，在水浴锅水浴加热后溶 液显蓝色。 d、甘油的检验结果：生成砖红色沉淀。 五． 分 析讨论 实验需要注意的几点 实验过程中乙醇、 氯仿、 丙酮和用量一定要控制好 ，在使用这一些有毒的试剂一定 要做好安全准备，防止实验过程中中毒的发生， 在做综合实验的所有过程中必须把每一步所用 的试剂清晰的列出来， 实验过程中总结 怎么样改进提取分离的方法让所提取的最终产物的量最多，在实验过程避免试剂的浪费，和所提取的物质 的浪费，在工业生产过程中怎么样能大规模的进行生产加工，通过综合实验提高对生产应用的发展有什么 推动作用 六． 总 结（心得体会） 生物学是一门以实验为基础的自然科学， 现代生物科学的发展尤其依赖科学 实验。在生物教学中，实验、学习和观察等实践环节对我们掌握生物学知识、科 学方法、培养我们的动手能力和形成科学素质都起到了至关重要的作用。 正是因 此，从我们开始接触生物这门学科开始， 就不断有生物实验课程， 锻炼我们各式 各样的能力。 但是，也的确是上过各式各样的生物实验课， 我才更加深刻的感受 到这次做的现代生物技术综合实验对我的影响有多大。 以前做实验， 大部分都是 照本宣科， 很少动脑筋去思考实验的前因后果， 对台上老师的讲解也都是一知半 解的混着。 但是，这次实验着实让我很费了一番脑子， 有深入的去了解每一个原理， 实 验操作的机理， 仪器的使用方法， 帮助我纠正和熟练许多操作， 同时让我认识到 自己以前的迷糊与不负责任， 也让我体会到全身心的投入到一件事中， 是如此快 乐和满足，还得到了好多在课堂上永远没有办法获得的知识。 还有在我们准备材料及实验步骤过程中遇到很多问题，没有彻底的准备好， 在实验过程中有很多的麻烦，比如，试剂的集体浓度没有说明，具体用到的时候 才反应过来。总之我们最好考虑清楚行动时会需要用些什么， 做些什么，将准备 工作做好，为后续行动铺垫，按其规律列好清单，会使得实验或者任何别的事情 做得更加顺利，有条理，排除做过多无用功的可能性，提高了效率的同时还降低 错误失误的出现概率，成功率也会增高。 参考文献 韩轶, 周扬, 等1卵磷脂的提纯、鉴定及应用 1氨基酸和生物资源 , 2001, 23 (1-2) : 28 ?31 李永安，韩小红 卵黄磷脂的提纯 [j ]应用化工， 2003， 32 (3) 田冰, 刘亚军, 等1 高效快速提取蛋黄卵磷脂的新方法 1 食品科技 , 2000, (6) : 30 ? 32 陈南羽 , 封禄田 1 卵磷脂的应用与开发 1 化学工业与工程技术 , 1999, 20 (5) 21?23 5李永安，李学 超临界CO2萃取高纯度蛋黄磷脂 [J]山西化工，2002 ,22 (7) 生化技术综合实验总结 综合实验 题目 鸡蛋中卵磷脂的提取与鉴定 实验人 学号 提交时间 实验时间 2012. 6 元成课 时数 22 字数 3159 综合实验课题的理论与实践意义：卵磷脂溶于乙醇，等脂溶剂。可利用脂溶 剂进行萃取卵磷脂，由于卵磷脂不溶于丙酮，利用丙酮溶液进行冲洗除去一部分 杂质提取出粗品，再通过金属离子沉淀法进行精提取。通过这次实验掌握卵磷脂 提取方法及其鉴别判定的方法，对卵磷脂进行定性的检测，了解卵磷脂的性质，掌握离 心干燥技术，熟练利用提纯技术，在实验过程中了解合作的精神，合作的最重要 性，提咼动手能力。 综合实验课题主要内谷及自我评价： 主要内容：利用95%乙醇在蛋黄溶液里进行浸提取，再加入过滤，加入一 定量的丙酮在旋转干燥仪器中把乙醇蒸发出来， 取溶胶性的物质，加入丙酮冲洗 除杂，冲洗多次取得粗品，让后再加入无水乙醇溶解，加入金属沉淀剂进行精提 取，取出少量精品，在碱性条件下溶解，分别用钼酸铵，斐林试剂，滤纸，氢氧 化钠，对卵磷脂进行定性检测。 自我评价：在这个实验过程中，通过我们组的每一个成员的分工与合作， 很顺利 的结束的这次实验，在这样的一个过程中我们也遇到了一些困难， 但通过我们的努力和 合作，一起解决了，从准备材料到设计实验的每一个步骤都是很重要的， 通过 实验巩固了我们的理论知识，培养了动手能力，熟悉实验环境和实验过程的注意 事项，及其使用药品的使用规则和安全因素，不可避免实验中会出现一定的错误， 所以，还要提高实验的科学和严谨性 实训 成绩 综述成绩 (20%) 操作成绩 (40%) 报告成绩 (40%) 总评成绩 指导教师签字
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